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乳糖发酵与ONPG试验的讲解

时间:2019-07-22 09:22来源:食品伙伴网作者:admin点击:

导读: 为庆祝第九届微生物检测与控制技术交流会召开,特此为大家讲授乳糖发酵与ONPG试验。 各位亲,那乳糖发酵试验与ONPG试验,你有木有傻傻地分不清?还是听额细细道来哈。 先说乳糖发酵试验,这是用来检测细菌分解乳糖能力的一种生化试验。大家知道,乳糖是葡萄糖和半乳糖
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 为庆祝第九届微生物检测与控制技术交流会召开,特此为大家讲授乳糖发酵与ONPG试验。
 
  各位亲,那乳糖发酵试验与ONPG试验,你有木有傻傻地分不清?还是听额细细道来哈。
 
  先说乳糖发酵试验,这是用来检测细菌分解乳糖能力的一种生化试验。大家知道,乳糖是葡萄糖和半乳糖这两个单糖,通过糖苷键连接而成一种双糖。而乳糖的分解呢,是乳糖在β-半乳糖苷酶的作用下,糖苷键发生断裂并产生葡萄糖和半乳糖。
  这β-半乳糖苷酶是在细胞内的咧,其实细菌分解乳糖,一般还需要一种位于细胞膜上的β-半乳糖苷渗透酶来参与。这β-半乳糖苷渗透酶的作用嘛,是将细胞外的乳糖分子主动转运到细胞内。所以说啊,乳糖发酵试验可以检测两种酶:β-半乳糖苷酶和β-半乳糖苷渗透酶。
 
  具有这两种酶的细菌,可迅速将乳糖分子主动转运到细跑内,在24小时内即可分解乳糖并产酸,导致乳糖发酵培养基的颜色发生变化,表现为乳糖发酵试验阳性。而缺乏此两种酶的细菌,因为不能分解乳糖产酸,乳糖发酵培养基不会变色,乳糖发酵试验呈现为阴性。还有一些乳糖迟缓发酵的细菌,只具备β-半乳糖苷酶,但是由于缺乏β-半乳糖苷渗透酶,乳糖只能通过被动扩散缓慢地进入细胞内,培养3天以上,才能使乳糖发酵培养基变色,表现为乳糖迟缓发酵。
 
  至于ONPG试验咧,是用于快速检测β-半乳糖苷酶的一种生化试验。与乳糖不同,邻硝基酚-β-D-半乳糖苷(ONPG)可迅速进入细菌细胞内,ONPG被β-半乳糖苷酶水解后,释放出黄色的邻硝基酚(ONP),培养基因此变黄,ONPG试验表现为阳性。细菌若没有β-半乳糖苷酶,就不分解进入细胞的ONPG,不能释放出黄色的ONP,ONPG试验结果也就为阴性。
  总而言之,不同的细菌具有不同的酶,乳糖发酵与ONPG试验可有以下四种结果。
 
  甲、乳糖发酵试验阳性,ONPG试验阳性: 对于大多数大肠埃希氏菌,由于同时具有β-半乳糖苷渗透酶和β-半乳糖苷酶,其表现为发酵乳糖,ONPG试验也为阳性。
 
  乙、乳糖发酵试验阴性,ONPG试验阴性: 对于普通变形杆菌,β-半乳糖苷渗透酶和β-半乳糖苷酶都木有,其表现为不发酵乳糖,ONPG试验为阴性。
 
  丙、乳糖发酵迟缓阳性,ONPG试验阳性:对于亚利桑那菌,虽然具有β-半乳糖苷酶,但缺少β-半乳糖苷渗透酶,其表现为乳糖迟缓发酵,ONPG试验还是阳性滴。
 
  丁、乳糖发酵试验阳性,ONPG试验阴性:有些不动杆菌和假单胞菌,β-半乳糖苷渗透酶和β-半乳糖苷酶也都是木有,虽然不能分解乳糖,但是却可将乳糖转化为乳糖酸,也能导致乳糖发酵培养基变色,表现为发酵乳糖的假象,由于缺乏β-半乳糖苷酶,其ONPG试验却是阴性滴。
 
  亲,这乳糖发酵试验与ONPG试验,你都能分清了吧 ?是不是美滴很,美滴很?不要着急,还有一个赠品呢:下面再说说ONPG试验的注意事项。
 
  1、良好的缓冲作用是ONPG试验的关键,所以说接种前最好将那ONPG溶液,在36℃水浴一段时间,以溶解在储存过程中产生的磷酸盐结晶。
 
  2、细菌的接种量要大些哈,这样既可加快反应速度,也有利于结果观察。
 
  3、ONPG试剂一般情况下是无色的,但有时其中的蛋白胨可致试剂呈轻微黄色,此时应加做阴性对照予以区分。
 
  4、需要提醒的是,ONPG试验不能用于产黄色素细菌的检测,如果怀疑培养基变黄是细菌产黄色素的缘故,要先离心再来进行结果判读。
 
  5、葡萄糖对β-半乳糖苷酶有抑制作用,在含乳糖的培养基上生长的细菌,其β-半乳糖苷酶活性也就更高。总之,用乳糖含量高的培养基,就对咧!
 
  主要参考文献:
 
  1、J F MacFadden. Biochemical Tests for Identification of Medical Bacteria[M]. Third Edition. Williams & Wilkins, Baltimore, 2000.
 
  2、Lapage S P, Efstratiou A, Hill L R. The ortho-nitrophenol (ONPG) test and acid from lactose in Gram-negative genera[J]. Journal of Clinical Pathology, 1973, 26(11):821-825.
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